本品采用了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，使用SARS-CoV-2 Spike蛋白基因替換逆轉(zhuǎn)錄病毒的包膜蛋白基因，與逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝質(zhì)粒和CMV-GFP-T2A-Luciferase質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝含Spike蛋白基因的假病毒，假病毒表面能表達(dá)SARS-CoV-2 Spike蛋白，并且病毒同時攜帶GFP和Luciferase熒光素酶報(bào)告基因，可通過觀察熒光信號和檢測熒光素酶活性評價(jià)假病毒感染細(xì)胞的活性，該假病毒無自主復(fù)制能力，安全性好，可用于SARS-CoV-2受體和藥物篩選、中和抗體檢測及疫苗效果評價(jià)等試驗(yàn)。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品檢測結(jié)果

圖1：不同體積SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T與HEK293T-ACE2熒光圖片

圖2：SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒侵染HEK293T與HEK293T-ACE2測定Luciferase的讀值

圖3：SARS-CoV-2 Spike蛋白假病毒用于中和抗體效果的評價(jià)

使用方法

1、細(xì)胞鋪板：

實(shí)驗(yàn)前一天，將待感染HEK293T-ACE2細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種量約為1×10⁴個細(xì)胞/孔，第二日，待細(xì)胞密度在30%左右時進(jìn)行病毒感染。

2、假病毒感染：

取出凍存的假病毒置于冰上融化或4℃條件下待其完全融化后，設(shè)計(jì)濃度梯度（一般需要設(shè)計(jì)3個濃度梯度），加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中感染目的細(xì)胞。以HEK293T- ACE2細(xì)胞為例，加入病毒量約為0.1-1 μL/孔，病毒感染后6 h后更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

3、感染檢測：

細(xì)胞感染假病毒換液后48 h，通過熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)和檢測熒光素酶的活性判定感染效率。（假病毒對不同細(xì)胞的感染效率不同，正式實(shí)驗(yàn)前建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最合適病毒添加量）

運(yùn)輸與保存方式

干冰運(yùn)輸。-80℃保存，有效期6個月。本品應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。

注意事項(xiàng)

1、每批次病毒滴度均達(dá)到1×10⁶TU/mL（HEK293T- ACE2）及以上，具體病毒滴度請參考具體批次號COA。

2、凍融會導(dǎo)致假病毒穩(wěn)定性降低，從而影響核酸抽提效果和QPCR檢測結(jié)果，使用時應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、病毒操作時必須應(yīng)在二級或以上生物安全實(shí)驗(yàn)室或生物安全柜中進(jìn)行，不可使用普通超凈工作臺操作病毒。

4、病毒操作時請穿好實(shí)驗(yàn)服，戴口罩和乳膠手套。

5、如果使用時本品不慎濺到眼睛、皮膚或其他身體部位請立即使用大量清水沖洗。

6、使用本品所產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)廢棄物需要通過高壓滅菌處理后按照醫(yī)療廢棄物處理要求進(jìn)行處理。

7、本產(chǎn)品僅作科研用途！

HB210706