產(chǎn)品描述

本品采用了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，使用SARS-CoV-2 Spike蛋白基因替換逆轉(zhuǎn)錄病毒的包膜蛋白基因，與逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝質(zhì)粒和CMV-GFP-T2A-Luciferase質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝含Spike蛋白突變位點(BA1.1)基因的假病毒，假病毒表面能表達(dá)SARS-CoV-2 Spike蛋白，并且病毒同時攜帶GFP和Luciferase熒光素酶報告基因，可通過觀察熒光信號和檢測熒光素酶活性評價假病毒感染細(xì)胞的活性，該假病毒無自主復(fù)制能力，安全性好，可用于SARS-CoV-2受體和藥物篩選、中和抗體檢測及疫苗效果評價等試驗。

BA1.1是以NCBI Reference Sequence: NC_045512.2中的Spike蛋白為假病毒刺突蛋白，具體突變位點為:A67V、 H69-、 V70-、T95I、G142-、V143-、Y144-、Y145D、N211-、L212I、R346K、G339D、S371L、S373P、S375F、S477N、T478K、 E484A、Q493R、G496S、Q498R、N501Y、Y505H、T547K、D614G、H655Y、N679K、P681H、N764K、D796Y、N856K、 Q954H、N969K、L981F。

產(chǎn)品組分

運輸與保存方法

干冰運輸。-80℃保存，有效期6個月。本品應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議分裝保存。

注意事項

1、每批次病毒滴度均達(dá)到1×10⁶ TU/mL（HEK293T- ACE2）及以上，具體病毒滴度請參考具體批次號COA。

2、凍融會導(dǎo)致假病毒穩(wěn)定性降低，從而影響核酸抽提效果和QPCR檢測結(jié)果，使用時應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、病毒操作時務(wù)必在二級或以上生物安全實驗室或生物安全柜中進行，不可使用普通超凈工作臺操作病毒。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服，戴口罩并戴一次性手套操作。

5、如果使用時本品不慎濺到眼睛、皮膚或其他身體部位，請立即使用大量清水沖洗。

6、使用本品所產(chǎn)生的實驗廢棄物需要通過高壓滅菌處理，按照醫(yī)療廢棄物處理要求進行處理。

7、本產(chǎn)品僅供科研使用。

使用方法

1、細(xì)胞鋪板：

實驗前一天，將待感染HEK293T-ACE2細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種量約為1×10⁴個細(xì)胞/孔，第二日，待細(xì)胞密度在30%左右時進行病毒感染。

2、假病毒感染：

取出凍存的假病毒置于冰上融化或4℃條件下待其完全融化后，設(shè)計濃度梯度（一般需要設(shè)計3個濃度梯度），加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中感染目的細(xì)胞。以HEK293T- ACE2細(xì)胞為例，加入病毒量約為0.1-1 μL/孔，病毒感染6h后更換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

3、感染檢測：

細(xì)胞感染假病毒換液48h后，通過熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡觀察綠色熒光蛋白表達(dá)并檢測熒光素酶的活性以判定感染效率（假病毒對不同細(xì)胞的感染效率不同，正式實驗前建議進行預(yù)實驗，以確定最合適病毒添加量）。

HB220801