疏水作用色譜法

在疏水作用色譜法（HIC）中，弱非極性固定相與高濃度的鹽的水溶液同時使用。該方法主要通過減少鹽的濃度來分離蛋白。 

在反相色譜中，蛋白通過與填料上烷基或芳基相互作用保留下來。

不同于反相色譜，在疏水反應(yīng)色譜中上述官能團(tuán)的密度較低，且蛋白分子只在一個或少數(shù)幾個位置上吸附。 

鹽濃度較高時會產(chǎn)生吸附作用，但若加入低百分比濃度的有機(jī)溶劑降低鹽濃度，則會產(chǎn)生脫附作用。 

盡管二者均以疏水作用為基礎(chǔ)，但HIC分離的選擇性明顯不同于反相LC。 

相對于RPC，HIC的zui高容量較低，但其優(yōu)勢在于：流動相條件（主要是含水流動相）通常不會破壞高階蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。

TSKgel HIC 色譜柱由三種從低到高不同疏水性的配體（丁基、醚和苯基）鍵合在聚甲基丙烯酸酯上的填料組成的。

醚柱與苯基柱所用的聚甲基丙烯酸酯基樹脂是一種多孔材料，孔徑大小為1000A，排阻限為1,000,000道爾頓，能提供高載量與高上樣量。TSKgel Butyl-NPR 是無孔基質(zhì)。在該基質(zhì)上，只有顆粒表面能進(jìn)行吸附。較短的運(yùn)行時間和良好的回收率使丁基柱成為高通量或QC分析的zui佳選擇。三種柱類型之間的比較請?jiān)斠娤聢D。

圖 1. 常規(guī)HIC色譜柱和無孔HIC色譜柱的比較