反相色譜法（RPC）于20世紀(jì)70年代中期問世，現(xiàn)已成為工業(yè)、學(xué)術(shù)及政府實驗室分析小分子量化合物的標(biāo)準(zhǔn)方法。

現(xiàn)在，RPC更成為了制藥業(yè)、化學(xué)工業(yè)及生物化學(xué)工業(yè)分離肽、蛋白質(zhì)及其它生物大分子的公認(rèn)方法。

與正相色譜法相反，RPC需要非極性固定相與極性流動相。流動相通常由水（緩沖液）與乙腈、甲醇、THF或2-丙醇混合構(gòu)成。

硅膠顆粒是最為常用的基質(zhì)，其與十八烷基硅烷（ODS）起衍生反應(yīng)。聚合物基質(zhì)已經(jīng)成為硅膠基質(zhì)的替代物，特別是在分析中性或堿性化合物的過程中，具有良好的表現(xiàn)。

RPC柱可用于分析多種化合物，包括中極性、無極性、酸性、堿性、兩性化合物等。RPC也是分析衍生氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的一種方法，但是蛋白質(zhì)淋洗需要高濃度的有機溶劑，因此會破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。