支原體污染PCR檢測(cè)試劑盒

PCR Detection Kit for Mycoplasma Contamination

支原體污染PCR檢測(cè)試劑盒，用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，可檢測(cè)屬于柔膜菌綱(Mollicutes)的支原體、脲原體、無膽甾支原體、螺原體、蟲原體、中間原體等超過一百種，與柔膜菌綱以外的其他微生物沒有特異性反應(yīng)。

支原體是一種直徑約為0.1-0.3 μm、無細(xì)胞壁的原核生物，具有變形能力，屬于柔膜菌綱，常被用作柔膜菌綱的統(tǒng)稱。支原體是最小的具有完整細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，靶向細(xì)胞壁的抗生素也對(duì)支原體無效。支原體種類繁多，通常為寄生性或腐生性，有些種類可作為正常共生菌存在，有些種類具有致病性，還有一些種類具有細(xì)胞侵入性。

支原體污染是基礎(chǔ)研究和工業(yè)生產(chǎn)中一個(gè)很常見的問題，據(jù)報(bào)導(dǎo)，有5-35%的細(xì)胞株受到污染；一些實(shí)驗(yàn)室由于對(duì)此不夠重視，實(shí)際上可能有高達(dá)80%以上的細(xì)胞株發(fā)生支原體污染。支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見，對(duì)培養(yǎng)基的需求有限，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。支原體污染能消耗營養(yǎng)物，促進(jìn)代謝積累，導(dǎo)致pH改變，誘導(dǎo)或壓制細(xì)胞因子表達(dá)，并改變培養(yǎng)細(xì)胞的代謝、增殖特征及形態(tài)。由于支原體污染能影響幾乎每一個(gè)細(xì)胞參數(shù)，所以很多研究都強(qiáng)調(diào)常規(guī)檢測(cè)正在培養(yǎng)的細(xì)胞，以確保觀察到的結(jié)果不被支原體污染所損害。

目前已知的支原體種類約200種，污染細(xì)胞培養(yǎng)物的支原體種類有20多種。其中95%的污染是由五種支原體引起：精氨酸支原體（Mycoplasma arginini），發(fā)酵支原體（Mycoplasma fermentans），豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis），口腔支原體（Mycoplasma orale）和萊氏無膽甾原體（Acholeplasma laidlawii）。精氨酸支原體和萊氏無膽甾原體為牛源性，主要由牛血清帶入；豬鼻支原體主要由胰酶（通常來源于豬）帶入；發(fā)酵支原體和口腔支原體為人源性，主要由實(shí)驗(yàn)操作人員帶入，人源性的支原體污染還包括唾液支原體和人型支原體。原代細(xì)胞的支原體污染占比不到1%，但是種類最多，已知有17種支原體，主要為鼠、禽和犬來源的支原體，如雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum）、關(guān)節(jié)炎支原體（Mycoplasma arthritidis）、肺支原體（Mycoplasma pulmonis）、犬支原體（Mycoplasma canis）等，一般是從原始的動(dòng)物組織中帶入進(jìn)來，因此種類比較多，并且有不確定性。歐洲藥典（EUROPEAN PHARMACOPOEIA）2.6.7指定了六種需檢測(cè)的支原體：萊氏無膽甾原體，雞毒支原體，豬鼻支原體，口腔支原體，肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae）和滑液支原體（Mycoplasma synoviae）。由上述內(nèi)容可知，引起細(xì)胞污染的支原體種類較為繁雜，并且可能存在未知種類，因此使用支原體通用性PCR引物更適合檢測(cè)支原體污染的需要，可以避免使用物種特異性引物可能導(dǎo)致的漏檢情況。

目前美國、歐洲、日本的藥典仍然推薦體外培養(yǎng)法作為檢測(cè)支原體污染的金標(biāo)準(zhǔn)。培養(yǎng)法通過使用選擇性培養(yǎng)基，可以達(dá)到很強(qiáng)的特異性，并且有很高的靈敏度，但是其缺點(diǎn)在于操作比較繁瑣，且耗時(shí)較長，完成一個(gè)完整的檢測(cè)需28天之久。對(duì)于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)而言，這是一個(gè)不可承受的時(shí)間成本。PCR檢測(cè)由于其特異性強(qiáng)、靈敏度高，且快速的特點(diǎn)，成為培養(yǎng)法的良好替代方案，正逐漸被世界各國所接受。

本試劑盒采用支原體通用性引物，可檢測(cè)上述提及的全部支原體，ZD檢測(cè)極限（LOD，100%檢出時(shí)的ZD模板濃度）為反應(yīng)液中10個(gè)支原體基因組，能在2到3小時(shí)內(nèi)獲得可靠的結(jié)果，是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速的檢測(cè)支原體污染的方法，具有以下特點(diǎn)： ①特異性引物是針對(duì)高度保守的支原體16S rRNA序列設(shè)計(jì)的，可用于檢測(cè)非常廣泛的支原體種類，不受真核細(xì)胞或細(xì)菌DNA干擾。經(jīng)本試劑盒測(cè)試的支原體菌株涵蓋了所有常見的支原體污染種類； ②靈敏度極高，ZD檢測(cè)極限僅需10個(gè)拷貝的支原體基因組； ③陽性對(duì)照所用引物與支原體檢測(cè)相同，可幫助判斷假陰性現(xiàn)象，避免假陰性導(dǎo)致的誤判； ④包含PCR反應(yīng)所需的所有成分，只需進(jìn)行一次PCR反應(yīng)，降低了交叉污染的幾率，使用方便。

由于支原體污染比較隱蔽，所以建議給細(xì)胞定期做支原體檢測(cè)，以免在未察覺的情況下給您的實(shí)驗(yàn)造成影響?？晒﹨⒖嫉淖龇ㄊ牵涸谛录?xì)胞進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)，以及細(xì)胞凍存入庫前，都應(yīng)該做一下支原體檢測(cè)，平時(shí)每三個(gè)月常規(guī)檢測(cè)一次。

如發(fā)現(xiàn)支原體污染，可用我公司的支原體清除劑進(jìn)行清除。支原體清除劑采用雙重殺菌機(jī)制，不易耐藥。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用。

我司可提供數(shù)十種支原體的種類鑒定和檢測(cè)，詳情請(qǐng)咨詢我司客服。

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