PMA-EMA-LED32光解儀：是一種輕質(zhì) LED輻照設(shè)備，設(shè)計(jì)用于在活性檢測(cè) PCR 應(yīng)用中對(duì)PMA及其他光反應(yīng)染料進(jìn)行控制時(shí)間和溫度的光處理。

適用于細(xì)菌，病毒，真菌的PCR分析，結(jié)合DNA,交聯(lián)等。樣本還包括生物膜，酵母，真核細(xì)胞，應(yīng)用食品 水安全和環(huán)境測(cè)試。

疊氮溴化丙錠（Propidium Monoazide，PMA）是一種光反應(yīng)的DNA結(jié)合染料，用于微生物（比如：細(xì)菌、病毒和真菌）的活力PCR（v-PCR）分析。作為一種DNA修飾劑和光反應(yīng)染料，PMA高親和結(jié)合DNA。經(jīng)可見光刺激發(fā)生光裂解后，PMA共價(jià)吸附到DNA上，這一改性的DNA不能被PCR擴(kuò)增。PMA染料不具細(xì)胞膜滲透性，因此，在含活死細(xì)胞的群體內(nèi)，只有死細(xì)胞對(duì)DNA修飾劑敏感，由于具受損的細(xì)胞膜。PMA染料的這一特性，使其高度適合通過PCR的手段來(lái)選擇性檢測(cè)活細(xì)菌。

疊氮溴化丙錠（Propidium Monoazide，PMA）具有以下特征：①利用PCR技術(shù)選擇性檢測(cè)活細(xì)胞；②死細(xì)胞特異性染料，結(jié)合到DNA上；③光活化后共價(jià)交聯(lián)到DNA上；④適用于多種樣本類型包括：細(xì)菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核細(xì)胞；能應(yīng)用在食品和水安全和環(huán)境測(cè)試，能與PCR、NGS、Sanger測(cè)序和LAMP技術(shù)結(jié)合使用。

疊氮溴化乙錠（Ethidium Monoazide Bromide，EMA）是一種具光親和標(biāo)記特性的熒光核酸染料。EMA經(jīng)光分解后，能共價(jià)結(jié)合到溶液和損傷的細(xì)胞核酸上。此染料能用來(lái)印記DNA上的藥物結(jié)合位點(diǎn)，檢測(cè)死細(xì)胞，鑒定DNA和tRNA上的乙錠結(jié)合位點(diǎn)和選擇性失活基因表達(dá)。EMA最特殊的用途是標(biāo)記死活細(xì)胞群內(nèi)的死細(xì)胞，因其相對(duì)來(lái)說(shuō)不具有細(xì)胞膜滲透性，則選擇性結(jié)合死細(xì)胞的DNA。EMA還能通過5′核酸酶PCR來(lái)區(qū)分死細(xì)菌和活細(xì)菌。EMA本身熒光較弱，當(dāng)與DNA結(jié)合后熒光增強(qiáng)約15倍，激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)約510/600nm。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.      工作電壓：AC220V/50Hz

2.  標(biāo)配1.5ml/2ml離心反應(yīng)管

3.   一次可允許18管或者32管樣品同時(shí)照明

4.   內(nèi)風(fēng)扇確保溫度低于37度

5.   照明時(shí)間自由設(shè)定：1-999分鐘

6.   LED光波長(zhǎng)465-475nm

7.   用途：可有效地激活PMA, PMAxx, EMA和相似的染料

技術(shù)參數(shù)：

應(yīng)用案例：

弧菌(vibrio)是水產(chǎn)品中為常見的致病菌，副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)是主要水產(chǎn)源致病菌，由該菌引起的食物中毒事件居細(xì)菌性食物中毒事件的首位，同時(shí)也被視為范圍內(nèi)導(dǎo)致腹瀉類疾病的為主要因素之一。 (vibrio cholerae)是導(dǎo)致人體產(chǎn)生霍亂疾病的主要源頭，流行廣泛且屬于烈性傳染病之一，曾多次引起大面積的疾病，主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐、腹瀉、失水，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡，如何快速、精準(zhǔn)和高效地檢測(cè)水產(chǎn)品中致病弧菌具有重要意義。

傳統(tǒng)定量檢測(cè)食品中副溶血性弧菌和的方法通常需要1周時(shí)間，基于DNA的 qPCR定量技術(shù)雖簡(jiǎn)便快捷，但無(wú)法區(qū)分樣品中死菌和活菌，容易導(dǎo)致假陽(yáng)性現(xiàn)象。光敏型核酸染料疊氮溴化丙錠(PMA)與qPCR技術(shù)相結(jié)合，可以選擇性地識(shí)別水產(chǎn)品中的活菌dna，可用于進(jìn)行活菌定量檢測(cè)。PMA前處理包括暗處理和光交聯(lián)兩個(gè)關(guān)鍵步驟，傳統(tǒng)的 PMA前處理方法通常在一個(gè)密閉的環(huán)境進(jìn)行暗處理，手持600w左右的鈉鎢燈進(jìn)行光交聯(lián)，過程繁瑣，全程人工操作費(fèi)時(shí)耗力；基于藍(lán)光led管的光交聯(lián)儀器PMA-EMA-LED32光解儀可大大簡(jiǎn)化pma前處理過程。

活性聚合酶鏈反應(yīng)

活性PCR是一種強(qiáng)大的技術(shù)，用于靈敏和快速地檢測(cè)活微生物。與耗時(shí)的培養(yǎng)方法不同，PCR 是一種快速靈敏的檢測(cè)方法。然而，正常的PCR不能區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。使用PMA 的 v-PCR，您可以獲得 PCR 的速度、靈敏度和特異性，以及可量化的活力。由于無(wú)需培養(yǎng)，您甚至可以檢測(cè)活菌但不可培養(yǎng) （VBNC） 細(xì)菌。v-PCR 技術(shù)不僅可以應(yīng)用于細(xì)菌，還可以應(yīng)用于酵母、病毒、真核生物和古細(xì)菌等其他生物。

光譜圖：

PMA 對(duì)死細(xì)菌DNA 的共價(jià)結(jié)合效率受到多種因素的影響，主要因素有細(xì)菌種類、菌液濃度、PMA 濃度和曝光時(shí)間等。PMA 濃度和曝光時(shí)間的選擇在于:PMA 濃度過低或曝光時(shí)間過短則不能充分結(jié)合和修飾死細(xì)菌的DNA; 而PMA 濃度高到一定程度則會(huì)有不容忽視數(shù)量的PMA 分子滲透進(jìn)活細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，長(zhǎng)的曝光時(shí)間將增強(qiáng)其對(duì)活菌DNA 的結(jié)合和修飾作用。因此采用PMA-qPCR 對(duì)某一研究體系中特定活細(xì)菌進(jìn)行走量檢測(cè)時(shí)，往往先在固定的純菌濃度下探究佳的PMA 處理濃度和曝光時(shí)間，之后用于實(shí)際從而達(dá)到更高的準(zhǔn)確率。

PMA -qPCR ~t菌檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用

(1)制備細(xì)菌懸液:培養(yǎng)好純菌后，適當(dāng)稀釋到一定濃度(如OD600=1，即經(jīng)過稀釋使得在600nm 下的吸光值為1)，取若干份等體積的菌，其中一半采用加熱和超聲處理結(jié)合制備死菌樣品，而另外一半不做處理為活菌樣品;

(2) PMA 處理:在不同的PMA 濃度和曝光時(shí)間下處理(1)中的活菌組和死菌組樣品;

(3) qPCR 擴(kuò)增和數(shù)據(jù)分析:提取(2) 中經(jīng)PMA 處理的樣品的基因組DNA ，以此為模板采用該細(xì)菌特異性的qPCR 引物進(jìn)行擴(kuò)增，得到各組的Ct 值(qPCR 熒光闊值同擴(kuò)增曲線交點(diǎn)對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù))綜合分析選出佳的PMA 處理?xiàng)l件。低的PMA 濃度和曝光時(shí)間為死細(xì)菌組Ct 值穩(wěn)定時(shí)(即不隨PMA 濃度和曝光時(shí)間的增加而發(fā)生顯著的，如Ct 值增量不超過1)的處理濃度和時(shí)間，高的PMA 濃度和曝光時(shí)間為活細(xì)菌Ct 穩(wěn)定時(shí)的處理濃度和時(shí)間;而佳的PMA 處理?xiàng)l件則在高和低的PMA 濃度和曝光時(shí)間之間的實(shí)際處理?xiàng)l件中擇優(yōu)選定，這樣在保證充分死細(xì)菌DNA 擴(kuò)增的同時(shí)又不會(huì)影響到活細(xì)菌DNA 的擴(kuò)增。